近些年，虽然生物医学技术有了长足的进步，但多种肿瘤的治疗仍面临巨大的挑战。肿瘤的治疗手段，最常用的是手术，放化疗，但临床患者中，存在一定比例无法手术或（及）对放化疗耐受的情况。新型的免疫治疗方法如免疫检测点阻断剂（PD-1, PD-L1）和嵌合抗原受体T（CAR-T）细胞治疗，虽然已成功用于临床并在部分类型的肿瘤治疗中取得巨大的成功，但上述两种免疫治疗手段，尤其是CAR-T免疫治疗，惠及的患者有限。NK（natural killer）细胞作为机体天然免疫的重要组成部分，以NK为基础的免疫治疗逐渐成为新的有潜力的研究方向之一 (1) (2)。

自从20世界70年代最早关于NK细胞的研究报告出现后，NK一直被认为是肿瘤免疫治疗的理想选择之一。因为NK细胞具有如下特点：一是细胞天然具有杀伤靶细胞（肿瘤细胞，被感染的细胞等）能力，该杀伤能力不需要预先激活。二是细胞可通过抗体介导的细胞毒作用（ADCC）杀伤靶细胞。三是细胞可以分泌细胞因子，趋化因子和生长因子等 (1) (3)。

NK逐渐成为免疫治疗领域冉冉升起的一颗新星。但NK为基础的免疫治疗，从研究到临床应用，还面临很多挑战，如高质量治疗用NK细胞的获取，激活，扩增等。目前，治疗用NK细胞的来源主要有iPSC诱导分化而来，或从血液中分离NK并进一步激活扩增等。本期，小C将与您分享，用无Ficoll 淋巴细胞分离系统（X-LAB），从外周血样本中分离PBMC，对该分离的PBMC进行激活扩增处理后，收获高质量NK细胞的相关数据*。该分离方法具有封闭系统，操作简单，NK回收率高，细胞活率等状态维持良好，且不引入Ficoll 外源物等特点。

图1.  Corning X-Lab 从全血中分离单个核细胞流程图

Corning X-lab 无需添加密度梯度分离液，基于外周血中不同细胞类型的密度差异，利用沉降并结合光学分析，在封闭系统中分离外周血单个核细胞，整个细胞分离处理过程只需要35分钟，快速，简单可靠

图2.  Corning X-Lab 从全血中分离单个核细胞的回收效率

康宁X-LAB分离获得的PBMC，在回收率上优于手动法密度梯度离心，细胞活力相当

图3.  Corning X-Lab 从全血中分离单个核细胞组成分析

利用流式细胞仪分析手动法和X-lab 法分析各自分离获得的单个核细胞，其各自细胞组成分类和得率没有明显差异

图4.  Corning X-Lab 分离获得的PBMC 进行NK 细胞的活化与扩增

分别取3X10⁷利用手动法和X-Lab 分离的PBMC 细胞，利用NK细胞因子活化诱导试剂盒

进行NK 细胞的扩增，培养周期15 天，其细胞形态上没有明显差异

表1.  Corning X-Lab 分离获得的PBMC 进行NK 细胞的活化扩增结果比较X-Lab 和手动法分离PBMC 的

NK 细胞扩增， 从NK细胞收获总量，NK细胞纯度上两者没有显著差异

结论和分析